验孕棒钩状效应是指什么

验孕棒钩状效应是指什么

免疫酶联法钩状效应

警惕化学发光检测中的“钩状效应”化学发光法具有?灵敏度和?特异性，可以定量检测多种激素、肿瘤标志物、感染性疾病标志物等，为很多疾病的诊治提供了极?的便利。

近年来，在我国各级医院中化学发光分析仪逐渐得到普及，使其与?液分析仪、?化分析仪等?样，成为检验科的标配和主?仪器。

化学发光仪及其配套试剂的?产?商中，既有各?国外品牌，也有诸多国内后起?商。

笔者所在医院，虽地处西北?城，但也赶上了这股“春风”，除了原有的罗?电化学发光分析仪e411和e602外，更近?新添了?台国产化学发光分析仪（以下称“A仪器”），其主要?于性激素六项和感染性疾病标志物的检测。

化学发光法的普遍应?，虽然为疾病的诊治提供了强有?的?持。

但是，与许多实验室检测?法?样，化学发光法在实际应?中会受到?些因素的明显?扰，检验?员和临床工作人员如不能对这些潜在的?扰因素存在认知，就很有可能导致误诊误治，使患者权益受损，并为医疗纠纷埋下隐患。

下?就对近期笔者遇到的?例异常结果，及其背后的?扰因素叙述如下，希望能对诸位读者起到?点警?作?

案例描述?份妇科住院患者的?清?绒?膜促性腺激素（HCG）标本，在罗?e602上第?次测得的结果为>10000mIU/mL,进?选择1:20仪器?动稀释后，结果为>200000mIU/mL。

为了看?下对于这样?值的标本，装机时间不长的A仪器表现如何，我们把原?清放到了A仪器上检测，却测出HCG为6647 mIU/mL。

同?份标本怎么会有如此?的差异呢?

通过查询得知，该患者的临床诊断是葡萄胎，那么HCG浓度明显偏?是很有可能的。

因此，在e602上对该标本进?步稀释后，更终得到HCG浓度是1246970mIU/mL，我们将此结果报告临床。

之后在A仪器上，选择?动1:100稀释后，也测得HCG为553951mIU/mL。

可见A仪器在未稀释时，测出的6647mIU/mL是?份“虚假”的低值结果。

六天后，该患者复查HCG，结果为8565mIU/mL（未稀释，E602测得）。

假设我们是使?A仪器测定HCG，并将其测出的6647mIU/mL直接报告临床的话，必然会严重误导妇科医?对该患者诊疗的判断。

A仪器稀释前后的HCG结果迥异，我们分析是由于该检测体系在?浓度时发?了“钩状效应”。

什么是钩状效应钩状效应是指免疫检测（immunoassay）中采?双抗体夹?法时，在?定的浓度范围内，分析物的浓度与检测信号值呈正?，但是，当超过某?浓度界限后，信号值反?随着浓度的增??下降的现象。

因为浓度与信号值的整条曲线形似钩?，所以称作钩状效应（图1）[1]。

hiv钩状效应

从发现病毒到发明检测1983年，Robert·Gallo博士首次在免疫系统细胞中培养出一种逆转录病毒，这种病毒命被名为HTLV-III。

一年后的1984年英国国务院部长玛格丽特·赫克勒(Margaret Heckler),宣布Robert Gallo博士和他在美国国家癌症研究所已经发现了艾滋病的病因,逆转录病毒HTLV-III。

第一个发现HIV的人Robert Charles Gallo博士在1985年FDA批准了第一项HIV血检,ELISA酶联法,检测血液中的HIV抗体。

美国血库开始对储血和用血进行筛查。

HIV抗体检测正式面世。

1987年4月,FDA批准了Westernblot血液检测（免疫印迹实验）试剂盒,这是一种更具有特异性的HIV抗体检测方法，也是沿用至今的HIV确诊试验方法。

5年后的1992年，FDA批准了一种HIV快速诊断测试剂盒,HIV快速筛查胶体金试验正式面世,该实验也是目前HIV感染初筛中更常用的试验,市面上试纸大多为胶体金检测。

不久后的1994年，全球首款无创HIV检验方法获批，HIV口腔粘膜渗出液试剂盒，这就是我们现在常说的“唾液”试纸。

1996年，FDA批准首套自我检测工具包和病毒载量检测。

至此HIV监测可及性已大幅度提高，窗口期也大幅度缩短。

从1代到4代目前，检测 HIV的方法有 100多种[1]。

检测种类虽然繁多，但可分为两大类：抗体检测、病毒检测。

病毒检测包括细胞培养 (病毒分离 )、p24 抗原检测和病毒核酸检测 。

从第 1代 HIV抗体检测试剂问世到现在[2], HIV血清学检测试剂已经发展到了第 4代。

1985 年 3 月,FDA 批准了第 1 个用于血筛的HIV 抗体筛查试剂[3],是以体外培养的 HIV 裂解抗原包被反应板,由于包被的抗原蛋白浓度、纯度低和结构不稳定,因此灵敏度和特异性都不高,但第 1 代筛查试剂的出现仍然具有划时代的意义,标志着 HIV 血液筛查试剂的诞生和使用。

第一代窗口期约为三到六个月,这也是很多教材上关于HIV窗口期三个月的出处。

随后的1990年发展了第2代HIV血液筛查试剂[3],包被的抗原为基因工程重组或人工合成肽,酶标记物为抗人 IgG 抗体,可同时检测 HIV-1 和 HIV-2 型,特异性和灵敏度都有所提高,HIV 检测试剂得到进一步发展。

但是二代试剂也有相应的缺陷：无法检测HIV-1 O组。

且对第二代试剂来说,若抗体浓度处于一个较高的水平,可能有假阴性的情况发生。

因需要稀释抗体再进行检测,因而会导致抗体稀释后在一定时间浓度小于检测下限,通常窗口期为8-10周左右。

酶联免疫法中的钩状效应钩状效应是指在双抗体夹心法测抗原的一步法ELISA中,测定显色随着待测标本中抗原浓度的增加而升高至一定程度后,测定吸光度即随抗原浓度的增加而开始下降直到不显色,而出现假阴性结果。

强阳性标本易误测为弱阳性,甚至出现假阴性结果,致使漏检。

一代二代试剂是间接法试剂，在目前已经被淘汰。

1994年，第三代试剂问世[3]，相比第二代检测改为了双抗原夹心法，酶标记物也升级成特异性HIV抗体，同时包被了O型HIV抗原。

三代试剂可同时测定IgG、IgM，大幅推进了HIV 血液筛查试剂的发展，将窗口期由10周缩短到3周[8]。

双夹心法的应用也避免了假阴性的产生，检测者进行检测时无需稀释样本,保证了敏感性，降低了检测操作难度。

总的来说，三代试剂既保证了检测的特异性，又完善了检测的敏感性，同时实现了窗口期的“大跃进”。

1998年，在第三代检测基础上，第四代HIV血筛试剂诞生。

它能同时检测HIV的p24抗原与抗体 [3]。

相比前第三代试剂，四代试剂把检出时间又提前了4～5天左右，窗口期缩短了近1周。

在艾滋病的早期诊断中，它明显优于三代，仅有2周左右的窗口期。

[5]但是，四代检测中，抗原和抗体同时在反应板上，存在相互干扰的可能。

这影响了免疫反应的特异性，使四代检测的假阳率略高于三代检测。

抗体到病毒本体在过去，大多数对HIV的检测是通过病毒以及机体对病毒的一些反应，从而间接对HIV进行检测。

而随着科技革新，直接对病毒本身进行检测的方法,登上了历史的舞台。

1996年,HIV-RNA检测通过FDA审批。

截至21世纪初，全世界已有33国开始使用核酸检测筛查血液中的HIV：德国于1997年引进核酸检测，瑞士于2002年在法律中规定，必须使用核酸检测筛查献血者HIV。

[6]从 2010 年开始，国内在部分血站试点开展核酸检测。

2015年，要求全国实现血站核酸检测的全覆盖[8]。

血站核酸检测 保障血液安全目前，在HIV感染筛查的指标中，HIV核酸检测更为敏感，优于酶联免疫检测，可有效缩短窗口期。

有研究显示，核酸检测可将HIV感染窗口期缩短至2、 93 天[7]。

目前得益于HIV-DNA检测技术的出现，窗口期得以进一步的缩短。

常见的RNA 20精度核酸检测，窗口期为1周左右，它距离广泛运用于HIV初筛还有一定距离。

这是因为，这种检测出报告较慢，可及性较差，且价格过于昂贵。

核酸检测用于初筛大多是婴幼儿的HIV诊疗方面，因为婴幼儿抗体产生并不是那么稳定，对成年人来说，除可能暴露HIV后处在严重恐艾情绪中的人，一般还是推荐在2-3周后进行抗原抗体联合实验或在4到6周后进行抗体筛查。

从抽血到自检快速HIV检测，是利用特异性高的抗体抗原反应、免疫层析分析技术，来确定血液中是否含有1型或2型HIV抗体（这些抗体通常是gp4

1、gp120、gp160包膜蛋白）。

在1992年5月27日第一个HIV快检上线后至今，HIV快速自检方案也在快速发展，除第一代检测外，其他检测均有发展出HIV快检方案。

现我国市场上可以获得多种国产及进口的HIV 快速诊断试剂，包括硒标记法、金标记法和凝集法。

目前，国内血站为减少血液报废，也在献血前使用快速 HIV检测试剂初筛献血者。

其中快速胶体硒法 30 min 内即可报告结果，与 ELISA 法相比在阳性结果方面无统计学差异，与 WB 确证试验比较，有更高的敏感性和准确性，但特异性较WB低（较高的假阳性可能[8]。

快速检测不仅相对便宜，而且检测效能显著。

快速检测不但可以使用血清、血浆，全血，唾液，甚至尿液筛查不同病原体，而且还具有操作简便，试剂反应时间短，结果可以目测，不需要特殊的仪器设备，对技术人员要求不高，试剂可以在室温条件下保存等优点，使得检测更为便利。

参考文献[1]Weber B, Berger A, Rabenau H, etal 。

J ClinMicrobiol, 2002, 40(4):1420-1426、[2]沈霞。

艾滋病的实验室诊断 [ J] 。